CellCountingKit(CCK-8)细胞增殖与毒性检测

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CellCountingKit(CCK-8)细胞增殖与毒性检测

很多的科研的同学需要做增殖细胞增殖相关实验，而且想让自己的实验比较有说服力，不少童鞋都是有请教大神做哪种实验的好，是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪种实验比较有说服力？这时候问题就来了为什么将Cell Counting Kit (CCK-8)作为细胞增殖与毒性检测佳选择？看过来人的经验之谈。

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），适用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

实验原理：
WST-8属于MTT的升级产品，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
CCK8-Figure

为什么将Cell Counting Kit (CCK-8) 作为细胞增殖与毒性检测佳选择：

如下表，CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较，结果不言而喻！

检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法
甲臜产物的水溶性 差（需加有机溶剂溶解后再检测） 好 好 好
产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用
检测灵敏度 高 很高 很高 高
检测时间 较长 较短 较短 短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷
* 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到佳测定时间
* 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰（扣除空白孔即可）
产品名称及描述 货号 产品说明
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) KTC011001 详情
CCK-8法细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液（2000-5000 cells）。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板加入10 μl 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要让孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

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